2XRAPA HiFi PCR Mix試劑

特征
超保真擴(kuò)增：~280倍Taq的保真性能，是載體構(gòu)建、點(diǎn)突變、NGS模板擴(kuò)增、基因合成的最佳用酶。 快速擴(kuò)增：具有6kb/min的擴(kuò)增能力。 長片段擴(kuò)增：質(zhì)粒、λ DNA 等簡單模板可以有效擴(kuò)增>20 kb，基因組可以有效擴(kuò)增>8 kb，cDNA可以有效擴(kuò)增>8kb。
儲存
長期儲存置于-20°C以下，可保存2年，避免反復(fù)凍融；短期使用置于4°C（3個月）保存，一經(jīng)融化后請放置于4°C，勿再凍存。
反應(yīng)實(shí)例
1. 長片段擴(kuò)增能力
分別以λDNA、human gDNA、human cDNA為模板，使用RAPA HIFI PCR Mix進(jìn)行擴(kuò)增，循環(huán)數(shù)統(tǒng)一為28 cycles，結(jié)果如上圖所示，對于不同種類DNA模板的長片段靶基因，RAPA HIFI PCR Mix均有良好的擴(kuò)增性能。
常見問題及解決方案：
無擴(kuò)增或產(chǎn)量低 循環(huán)數(shù) 退火溫度 模板DNA純度和用量 延伸時間 引物用量 引物設(shè)計(jì) 增加循環(huán)數(shù)至35~40cycles 以2℃為單位降低退火溫度 使用高純度的模板DNA，使用合適的模板量。 適當(dāng)增加延伸時間 在0.1μM~0.5μM之間選取合適的引物量 重新設(shè)計(jì)優(yōu)化引物 出現(xiàn)雜帶或Smear 退火溫度 引物濃度 循環(huán)數(shù) 模板DNA使用量 引物 以2℃為單位提高退火溫度 降低引物濃度至0.2μM 降低循環(huán)數(shù)至25~28cycles 使用合適的模板量，不要過多使用 重新設(shè)計(jì)優(yōu)化引物

恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

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ThermoStable V Reverse transcriptase（200U/ul）(無甘油)

TGIRT-III Reverse transcriptase (10pmol/ul) 50ul

RNaseOUT-RNase Inhibitor (40 U/μl)

RnaseOUT-RNase Inhibitor(80U/ul), 無甘油

Murine Rnase inhibitor(40U/ul)

Murine Rnase inhibitor(80U/ul), 無甘油

Equi-phi29 DNA Polymerase

Klenow Fragment(exo-)

Bsu DNA聚合酶 大片段

Sau DNA Polymerase

T4 DNA Polymerase (exo-)

Hi T7 RNA Polymerase

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