Golden 1st  cDNA Synthesis Kit試劑第一鏈反轉(zhuǎn)錄試劑盒采用穩(wěn)定高效的反轉(zhuǎn)錄預(yù)混體系5×Golden RT MasterMix進(jìn)行RNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，使用時只需加入模板

、引物和RNase Free H2O 即可，大大簡化了操作過程、提高了效率、減少了操作過程中的人為誤差。

MasterMix中添加了HL dsDNase（熱敏雙鏈特異性核酸酶），該雙鏈特異性核酸酶（又名gDNA Remover）

可在反轉(zhuǎn)錄的過程中，直接降解去除RNA中殘留的基因組DNA污染(可去除100ng基因組DNA)，

從而在定量PCR的檢測中無需考慮基因組污染的干擾，設(shè)計(jì)的定量PCR引物也無需進(jìn)行橫跨外顯子。

該試劑盒尤其適用于定量PCR檢測。

該預(yù)混體系包含點(diǎn)突變致RNase H活性缺失的Golden MLV Reverse Transcriptase反轉(zhuǎn)錄酶、dNTP、反應(yīng)Buffer、

gDNA去除試劑和RNase Inhibitor。該試劑盒采用的反轉(zhuǎn)錄酶去除了RNase H活性，從而避免反轉(zhuǎn)錄過程中降解RNA。

同時經(jīng)過突變文庫篩選，使得其熱穩(wěn)定性更強(qiáng)，可耐受55℃高溫反應(yīng)。相比于低溫條件下反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，

采用高溫反轉(zhuǎn)錄可顯著打開RNA二級結(jié)構(gòu)，從而提高復(fù)雜RNA模板的擴(kuò)增性能、提高反轉(zhuǎn)錄cDNA的長度和產(chǎn)量，

從而提高后續(xù)檢測的靈敏度。合成的第一鏈cDNA可廣泛用于2nd Strand的合成、雜交、PCR擴(kuò)增、Real-Time PCR反應(yīng)等。

組分

組分名稱數(shù)量

5XGolden RT MasterMix (with dsDNase)400 μl

20XOligo dT(25)&Random Primer100 μl

Rnase Free H2O1 ml×2

注：1.該制品可有效反轉(zhuǎn)錄mRNA、tRNA、LncRNA、ncRNA。

  2. 該制品不可反轉(zhuǎn)錄microRNA、病毒DNA/RNA樣品。

主要特征

dsDNase有效去除基因組的污染，抑制了因基因組污染引起的非特異性擴(kuò)增

55℃進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄的MLV反轉(zhuǎn)錄酶，能更好的轉(zhuǎn)錄含有復(fù)雜高級結(jié)構(gòu)的RNA模板

高效便捷的反轉(zhuǎn)錄預(yù)混體系

反轉(zhuǎn)錄引物為Random Primer和Oligo dT Primer預(yù)混的RT Primer Mix，可更好的合成樣品中的各種cDNA

儲存

2-8℃避光保存，可保存2年。

Golden 1st  cDNA Synthesis Kit試劑恒溫擴(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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