核酸內(nèi)切酶V (Endonuclease V)試劑來(lái)源于E.coli，通過(guò)基因工程重組表達(dá)獲得。該酶為Mg2+依賴(lài)的3’-5’核糖核酸外切酶,其可消化

幾乎所有線(xiàn)性RNAs底物，但不能消化環(huán)狀RNA(circular RNA)、套索RNA(lariat RNA)、3’突出端<7nt的雙鏈RNA。

Rnase R核酸外切酶可高效的去除不含二級(jí)結(jié)構(gòu)的線(xiàn)性RNA，從而純化獲得環(huán)狀RNA分子，便于后續(xù)RNA-sequencing

等實(shí)驗(yàn)研究。

單位定義

在20 mM Tris-HCl（pH7.5），100 mM KCl，0.5 mM Mg2+條件下, 37°C下水解1 μg的poly-r(A)產(chǎn)物所需酶量為1個(gè)活性

單位。

組分

名稱(chēng)數(shù)量

Rnase R (20 U/μl)25 μl/250 μl

10×Rnase R Buffer1 ml

應(yīng)用

生物樣品中環(huán)狀RNA的富集

內(nèi)含子套索序列的分析和鑒定等

環(huán)狀RNA研究

可變剪接研究

儲(chǔ)存

置于-20°C可保存3年，避免反復(fù)凍融。

核酸內(nèi)切酶V (Endonuclease V)試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類(lèi)型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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